Игх исследование расшифровка молочной железы

Иммуногистохимия при раке молочной железы: исследование и расшифровка ИГХ

Иммуногистохимическое исследование — это особая разновидность научно-медицинского анализа, которая определяет чувствительность опухоли злокачественного типа к определенным веществам.

На основе ИГХ можно подобрать максимально эффективный способ безоперационного лечения онкологического заболевания, определить эффективные и отсечь заведомо бесполезные препараты.

Для чего используется иммуногистохимия?

Иммуногистохимическое исследование грудной железы используется для предварительной диагностики и уточнения диагноза при подозрении на злокачественный характер опухоли, т. е. рак. Самым распространенным видом заболевания, при котором в обязательном порядке проводится этот анализ, является карцинома.

Иммуногистохимический анализ позволяет определить:

1. Точный вид образования (необходимо для определения схемы лечения).
2. Границы распространения метастаз в организме.
3. Источник метастазов, т. е. первичный очаг заболевания.
4. Стадию развития рака, если он есть.
5. Скорость метастазирования клеток (это называется пролиферация).
6. Взаимодействие опухоли с гормональными либо другими препаратами, ее чувствительность к лучевой терапии, химиотерапии и т. д.

Идея метода иммуногистохимического анализа состоит в том, чтобы определить чувствительность (резистентность) метастазированных клеток к определенным веществам гормонального и иного характера.

На поверхности каждой клетки находятся рецепторы к определенным веществам, тем или иным факторам. Это особые белки, называемые антигенами. Они могут вступать в реакцию (связываться) с другими веществами.

Решающее значение имеет наличие рецепторов к эстрогену и прогестерону, они маркируются в анализе как ER — рецепторы к эстрогену, и PR — рецепторы к прогестерону.

Факторы, перечисленные выше, в обязательном порядке входят в любой иммуногистохимический анализ. Дополнительно, по усмотрению врача, могут быть назначены тесты на некоторые другие, например, на VEGF — это сосудистый фактор роста.

ИГХ проводится с помощью специальной сыворотки, содержащей антитела, которые обладают способностью связываться с белками-рецепторами. Если в опухолевой ткани присутствуют определенные факторы-антигены, то антитела в сыворотке дают с ними химическую реакцию, если этих факторов нет, то, соответственно, реакция не происходит.

к оглавлению ↑

Как проходит исследование?

Для анализа используют биоматериал непосредственно самой опухоли. Он может быть получен методом биопсии, так называется способ забора биологической ткани через прокол. Либо используется опухолевая ткань, оставшаяся после операции.

При онкозаболеваниях молочной железы первый вариант предпочтительнее, т. к. даст возможность предварительно диагностировать множество параметров заболевания, назначить лечение, которое может позволить обойтись без операции — мастэктомии.

После этого полученные ткани заливают парафином, таким образом, производя консервацию для длительного хранения (чтобы при необходимости можно было бы повторить этот анализ или провести другой без повторной биопсии).

После этого специалист под микроскопом делает тончайший, толщиной около 1 мкм, срез ткани и производит его окрашивание сывороткой, содержащей антитела, меченные определенным способом.

В числе этих способов могут быть:

• флуоресцентный краситель;
• радиоизотоп;
• фермент;
• металл либо металлопротеин.

Все вышеперечисленные вещества, в нано-дозах добавленные в сыворотку, являются метками, предназначенными для визуализации химической реакции антигена с антителом, которые дают визуальный эффект — материал, в котором есть рецепторы, например, к прогестерону, окрашивается в определенный цвет.

Либо реакция фиксируется прибором, если в качестве метки использовался радиоизотоп либо металл. Если эффекта нет, значит, реакция не произошла — соответственно, этот фактор в опухоли отсутствует.

Срок проведения исследования — от одной до двух недель.

Время хранения биоматериала в парафине — несколько лет. Исследование проводит врач-патологоанатом, имеющий специальный сертификат на право проведения ИГХ, интерпретацией результатов занимается онколог.

к оглавлению ↑

О чем говорят результаты?

Основными показателями являются, как упоминалось выше, рецепторы к прогестерону — PR, эстрогену — ER, фактор наличия HER2 — отрицательный либо положительный, а также фактор ki-67, определяющий динамику развития опухоли. Расшифровка результатов иммуногистохимии при раке молочной железы выглядит так:

• Если в новообразовании присутствуют рецепторы к женским половым гормонам — эстрогену и прогестерону — то опухоль может развиваться под их воздействием, при нормальном или повышенном содержании этих гормонов в организме. Этот вариант рака считается одним из тех, что дают наиболее благоприятный исход при своевременной терапии.Для его лечения используют препараты антиэстрогеновой группы, такие как Фарестон и Тамоксифен, которые блокируют рецепторы ER и В результате этого подавляется распространение метастаз, злокачественное образование уменьшается и погибает.
• Рецептор HER2 или HER2 New — это протоонкоген, его повышенное содержание является плохим фактором. HER2-положительные онкологические образования занимают примерно четверть среди всех раковых заболеваний грудной клетки, они характеризуются повышенной скоростью роста и устойчивостью к гормональной терапии. Для лечения HER2-положительного рака используется Трастузумаб (Герцептин), но он не оказывает никакого воздействия на HER2-отрицательный рак.Таким образом, установить HER2-статус больного раком молочной железы жизненно необходимо для его лечения. Этот статус выражается в оценках от 0 до 3, либо разные степени его маркируются знаком «+». Оценка 0 означает, что реакция с рецепторами HER2 не произошла – это HER2-отрицательный рак. Показаны гормональные препараты, не показан Трастузумаб. Если исследуемый материал изменил свой цвет, то оценивается градация цвета по шкале от 1 до 3 (либо от + до +++):
  • Слабо окрашенный материал, получивший оценку 1 или 2, говорит о том, что необходимо провести повторный анализ. Эта оценка считается двусмысленной.
  • Значительно окрасившаяся ткань, получившая оценку 3, говорит о том, что HER2-статус положителен. Не показаны антигормоны, показан Герцептин.

• Ki-67 — это фактор, определяющий скорость развития метастаз, т. е. маркер пролиферации.

  Он выражается в процентах, и кроме скорости распространения раковых клеток говорит еще о том, какое лечение будет эффективнее.

  При высоком ki-67, свыше 30%, более эффективной обычно является химиотерапия, при низком — 10-15% — рекомендуется лечение гормональными препаратами, если факторы ER и PR дали положительную реакцию.

  Статистика говорит, что наиболее благоприятный исход прогнозируется при ki-67 до 15%. В этом случае излечивается и выживает 90-95% больных. Если этот показатель свыше 30%, то прогноз, с учетом всех остальных факторов (например, HER2-положительном статусе) может даваться неблагоприятный. Ki-67 90% и выше означает последнюю стадию рака. Шансы на выздоровление — 5-10%.

Существуют 4 подтипа рака:

1. Люминальный А — рецепторы к женским гормонам положительные, к HER2-отрицательные, ki-67 — 14% и менее.
2. Люминальный B — рецепторы к женским гормонам положительные, к HER2-отрицательные, ki-67 — 15% и выше.
3. Erb-B2 сверхэкспрессирующий – HER2 положителен, рецепторы к эстрогену и/или прогестерону отрицательные.
4. Базальноподобный, он же «трижды негативный». Отрицательная реакция на все факторы.

Стоимость исследования, в зависимости от количества проверяемых факторов, составляет 4-5 тысяч рублей за стандартный анализ на описанные выше факторы. Если необходимо проверить реакцию с большим количеством антител, то цена исследования может быть значительно выше — от 10-15 тысяч.

Дайте нам об этом знать — поставьте оценку (3 votes, average: 5,00 5)
Загрузка…

Источник: https://ginekologii.ru/mammologiya/rak-grudi/igx-pri-rake-molochnoj-zhelezy.html

Иммуногистохимия рака молочной железы: как проходит и что дает, нормы и расшифровка

Давайте для начала мы разберем, что же такое иммуногистохимическое исследование. Под ним подразумевается микроскопическое исследование ткани, которое основано на выявлении антител на патологические вещества.

Разделяют два метода исследования:

• прямой (прямая реакция антител непосредственно на патологическое вещество);
• непрямой метод (патологические вещества, распознаются с помощью вторичных антител).

Способы маркировки:

• ферменты — белковые молекулы, они же молекулы РНК. Так например: щелочная фосфатаза (фермент гидролаза);
• флуоресцентные — тот же физический процесс, например — флуоресцеин — органическое соединение;
• электроно-плотные частицы, к таким относится золото.

Используют для:

• изучения и исследования секреторных процессов, в том числе синтетических;
• распознавания гормонов рецепторов;
• выявления различных типов, родов клеток по их свойствам.

Для чего используют иммуногистохимию при раке молочной железы

В области исследования грудной железы данное исследование используется в качестве предварительной диагностики для установления точного диагноза, в том числе при злокачественных образованиях. Данное исследование дает возможность определить следующее:

• Точное образование (доброкачественное или злокачественное) и назначение правильного лечения.
• Точное месторасположение (наличие метастаз в организме и их дислокацию).
• Первоначальный очаг заболевания.
• Стадию заболевания (например, степень рака).
• Пролиферацию клеток (распознать скорость размножения и развития раковых клеток).
• Ответ раковых клеток на медикаменты, их чувствительность, также можно отследить чувствительность к химиотерапии, к лучевой терапии.

Исследование способно детально изучить заболевание, что дает возможность полностью диагностировать заболевание и подобрать правильное лечение. Это играет не маловажную роль в диагностике, лечении, продолжительности жизни онкологических больных. Также можно сказать, что с помощью данного метода можно:

• Иммуногистохимия при раке молочной железына более раннем сроке диагностировать заболевание;
• выяснить непосредственный очаг заболевания;
• найти границы заболевания;
• определить точное место образования;
• определить точный вид новообразования;
• определить точную стадию развития;
• определить рост патологических клеток;
• узнать реакцию на препараты (в частности, на гормоны, на лучевую терапию и так далее);
• определить необходимость операции;
• помогает точно оценить качество лечения.

В основном данная диагностика используется для изучения (исследования) любой ткани человеческого организма. Основа для проведения данного исследования — это любое новообразование, которое предполагает развитие рака. Также исследование проводится для изучения эндометрия:

• при метастазах;
• при бесплодии;
• после неудачных попыток ЭКО;
• при различных заболеваниях матки;
• при различных видах патологий органов малого таза;
• при постоянных невынашивания плода;
• при заболевания эндометрия.

Исследование не имеет абсолютных противопоказаний. Препятствием для ИГХ может быть, только невозможность по каким либо причинам забора материла на исследование.

Как происходит исследование

Данный вид исследования может проводится только в специализированных лабораториях, при этом врач должен иметь специальную квалификацию, пройти специальное обучение.

Забор проходит непосредственно пораженного участка кожи с помощью биопсии. Также забор материала может происходить во время хирургического вмешательства на молочной железе.

Потом полученный материал специально обрабатывается и консервируется. Для этого она заливается парафином. В таком виде, в парафине, материал может правильно храниться в течении многого времени.

В дальнейшим нарезанные пласты окрашиваются с определенными антителами и все это изучается под микроскопом. В некоторых лабораториях изучается окрашенный материал на автоматическом приборе.

Ихг эндометрия

Показания:

• две-три неуспешных процедур ЭКО;
• не первое (постоянное) невынашивание плода на ранних сроках;
• бесплодие.

Во время исследования могут выявить такие заболевания как:

• эндометрит,
• гиперплазия,
• неполную трансформацию эндометрия,
• нарушение фаз развития
• и другие заболевания.

Как показывает практика, именно заболевания, связанные с эндометрием на 73% являются причиной бесплодия.

Подготовка к исследованию

Данное исследование проводится в определенный день менструального цикла, обычно на 5-7 день смотрят воспалительные процесса эндометрия, на 20-24 день цикла — оценивают секрецию, смотрят рецепторную функцию.

Для этого пациентке рекомендуют:

• не принимать гормоны за неделю до анализа;
• не принимать кровоостанавливающих препаратов;
• правильная интимная гигиена.

Как проходит процедура

Процедура происходит на гинекологическом кресле. Женщину обезболивают специальными препаратами и вводят зеркало. Делается санация половых органов. Вводится специальный прибор — система гистероскопа и проводится забор. Далее убирают прибор, проводя санацию органов.

Потом женщина находится под наблюдением врача до полного восстановление, примерно 1-2 часа.

Результаты примерно готовятся 3-5 дней. Оценить результаты может только специалист.

Результаты ИХГ молочной железы

Что определяет анализ:

HER2neu или, по-другому говоря, человеческий рецептор эпидермального фактора роста. Несет ответственность за продукцию белка. При поражении раковых клеток усиливается беспорядочный рост.

Если результат пишется 1 (+), то это говорит о том, что избытка белка нет, следствие — нехорошее состоянии опухоли.

При 2 (++) обычно назначают повторное исследование.

При 3 (+++) рассматривают как положительную опухоль, которую обычно подвергают медикаментозному лечению.

ER uPR данный вид гормонов способствует стимуляции роста патологических тканий. Если данные показатели увеличены, то это говорит о правильном лечении, что опухоль реагирует на гормонотерапию. Следовательно, если данные показатели понижены, то можно говорить о неправильном подборе лекарств. Опухоль развивается дальше.

Ki — 67, по данному показателю оценивают стадию опухоли и её характеристики. Если результат дает повешенные цифры, то это говорит о быстром течении заболевания, наличии метастаз и, к сожалению, совсем не хороший прогноз. Данный результат отмечается в процентах. Так например:

• 11% — вполне хороший прогноз (выздоровление 93%);
• 21 % — говорят о нем как 50% на 50%, все зависит от организма человека;
• все показатели за 30% — оценивают как тяжелая стадия — высокоагрессивная;
• 90% — неизлечимо, приводит к смерти.

Так же данный индекс способствует к определению выбора лечения.

Ген p53 — способствует предотвращению роста патологической ткани. Данный ген является барьером для заболевания. Для начала заболевания служит мутация гена, например, наследственность или нарушение белковой матрицы.

VEGF — обозначается белок, которой несет функцию контроля жизнедеятельности ткани при условии недостаточного кровообращения. Высокие показатели данного белка говорит о росте опухолевой ткани, в следствии «хорошего» питания ткани.

В основном выделяют 4 типа рака:

• Люминальный А — при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-13% меньше.
• Люминальный В — при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-15% меньше.
• Erb — B2 — при этом: реакция рецепторов к прогестерону (эстрогену) отрицательная, к HER2- положительная.
• Базальноподобный — отрицательный показатель по всем категориям.

Определение экспрессии белков PD-1, PDL-1 и PDL-2

Принято считать, что отвечают за саму опухоль — PD-1, PDL-1 и PDL-2. Но они могут присутствовать не во всех патологических тканях. Для точного определения и назначения правильной терапии всем пациенткам, которым непосредственно показана иммунотерапия проводится такое исследование, как экспрессия белков PD-1, PDL-1 и PDL-2.

Данное исследование проводят с помощью флуоресцентной гибридизации FISH. В результате наличия экспрессии иммунотерапия назначается такими препаратами, как: Ниволумаб, Атезолизумаб, Пембролизумаб.

Цена иммуногистохимического исследования

Иммуногистохимическое исследование очень сложный анализ, в котором используются множественное количество онкомаркеров.

Стоимость исследования зависит от количества проверяемых факторов. Цена исследования начинается от 4 тысяч рублей и до 20 тысяч рублей.

Источник:

Что такое иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы представляет собой метод морфологического диагностирования, позволяет установить восприимчивость опухолевых клеток к специфическим веществам и служит стопроцентным методом определения злокачественности либо доброкачественности новообразования.

Что такое иммуногистохимическое исследование (ИГХ)?

Предметом проверки является строение пораженных опухолью тканей. При помощи микроскопа на предметном стекле изучают биоматериал, который предварительно обрабатывают специфическими белками.

Клетки новообразований для организма являются чужими элементами — антигенами (от англ. antibody-generator — создатель антител).

Он реагирует на них, вырабатывая протеиновые частички (иммунный ответ), способные вступать в связь и обезвреживать инородных агентов.

При иммуногистохимии применяется сыворотка, включающая белковые антитела, реагирующие с чужими элементами.

Это взаимодействие указывает на наличие или отсутствие новообразования, его малигнизацию, а также восприимчивость к половым гормонам.

Помимо того, этот метод позволяет подбирать наиболее эффективную тактику ведения больного, наглядно оценивать ее результативность и давать прогноз в каждом конкретном случае.

На бытовом уровне наглядно представить суть ИГХ можно, проведя клеевым прозрачным карандашом по листу. При осмотре он почти неприметен, но если присыпать его, к примеру, речным мелким песочком, то благодаря прилипшим частичкам след проступит явственно.

Показания

Исследование ИГХ назначается, если имеется опасение развития злокачественного образования молочной железы, и преследует цели:

• обнаружить болезнетворный процесс возможно раньше;
• выяснить местоположение больных клеток и определить, захвачены ли ими соседние ткани — очертить границы;
• найти источник метастазов, изначальный очаг болезни;
• уточнить вид опухоли и стадию ее развития;
• установить биологический резерв больных клеток: темпы разрастания, быстроту метастазирования; реакцию на гормоны, противоопухолевые препараты, лучевую терапию;
• определить надобность в хирургическом вмешательстве;
• оценить эффективность проводимого лечения.

Главными достоинствами данного метода является возможность обнаружения больных клеток и опухолевых факторов, чего нельзя достичь при гистохимическом анализе, и вероятность подбора максимально результативного варианта безоперационного лечения новообразований.

Противопоказаний данный метод не имеет и не проводится только в случае невозможности забора исследуемого материала (больной ткани).

При обследовании пациенток с проблемами репродуктивной сферы, помимо случаев злокачественных новообразований молочной железы, ИГХ будет информативен при онкологических заболеваниях матки и бесплодии.

Методика проведения анализа

Иммуногистохимическое исследование проводится в медицинских лабораториях автоматизированно либо мануальным способом, специально обученным врачом-патологоанатомом, обладателем сертификата на право его проведения.

1. Забор биологического материала для изучения — пораженной болезнью ткани — производится методом биопсии (прокола иглой) или во время операции на молочной железе.
2. На следующем этапе образец обрабатывают и консервируют, заливая парафином, чтобы избежать повторных заборов ткани. В виде парафинового блока биоматериал может храниться в течение нескольких лет.
3. Далее проводится микротомирование — нарезание на тончайшие пласты, не толще 1 микрона — специальным аппаратом.
4. Эти срезы впоследствии окрашиваются сывороткой с помеченными особым образом антителами и отправляются для изучения под микроскоп либо в автоматический прибор, в зависимости от выбора красителя-маркера.

Источник: https://Zetlex.ru/metody-lecheniya/immunogistohimiya-raka-molochnoj-zhelezy-kak-prohodit-i-chto-daet.html

Ключевые особенности проведения игх молочной железы при опухолевых новообразованиях

Сейчас иммуногистохимическое исследование получило широкое распространение в практике диагностики, лечения и профилактики различных онкологических заболеваний. В основном этот метод применяется для проведения диагностирования в отношении анапластических опухолей и гематопоэтических новообразований.

Иммуногистохимическое исследование

Был выведен целый ряд определенных иммуногистохимических маркеров для исследования рака молочной железы.

Маркеры позволяют с высокой степенью точности определять характер дальнейшего развития заболевания путем анализа развития опухоли и ее роста.

С помощью этого можно составить определенный план по проведению необходимых лечебных мероприятий и предсказать их эффективность в конкретно взятом случае.

Наиболее распространено при игх молочной железы использовать определение таких рецепторов, как• Эстроген(ER)• Прогестерон(PR)

Без исследования этих рецепторов будет сложно назначить правильную и комплексную гормонотерапию.

Игх при раке молочной железы

Присутствие эстрогенов и прогестеронов выявляют в различных тканевых частях. Они также присутствуют в молочных железах, участвуя при этом в процессах синтеза РНК и белков.

Игх исследование молочной железы

Иммуногистохимическое исследование применяют не только при онкологии молочных желез, но также и при таких патологических заболеваниях, как:• Бесплодие• Нарушение репродуктивных функций

• Злокачественные заболевания матки

У женского пола такое заболевание, как рак молочной железы встречается очень часто. Шансы заболеть составляют 1 к 11 в возрасте от 13 и вплоть до 90 лет.

Поскольку все возникающие в этом случае опухоли в достаточной мере зависят от уровня вырабатываемых гормонов, то их переизбыток может привести к зарождению и последующему развитию ракового заболевания.

Всем больным при раке молочной железы нужно в обязательном порядке пройти иммуногистохимическое исследование на предмет выявления экспрессии гормонов ЭР и ПР для того, чтобы уточнить этап развития заболевания и назначить гормональное лечение на основе вышеприведенных исследований.

Опухоли, которые содержат высокую концентрацию эстрогенов и прогестеронов в большинстве своем ведут себя неагрессивно, имеют малую активность. При лечении таких опухолей гормональная терапия будет оказывать значительный эффект.

Вероятность эффективности проведения гормонального лечения при опухолях, которые экспрессируют рецепторы к эстрогенам (ЭР+), составляет около 50%.

Вероятность же эффективности проведения гормонального лечения при опухолях, которые экспрессируют рецепторы и к эстрогенам, и к прогестерону (ЭР+/ПР+), составляет более 75% (благоприятный прогноз).

ИГХ исследование

При экспрессии опухолями малого количества рецепторов к эстрогенам (ЭР-), проведение гормональной терапии обычно малоэффективно и не приносит должного эффекта. Исключением из правила является экспрессия клеток опухоли к прогестерону (ЭР-/ПР+) при отсутствии экспрессии к эстрогенам (ЭР-). При таком раскладе эффективность проведения гормональной терапии возрастает до 10%.

Поэтому исследование экспрессии рецепторов ЭР и ПР крайне необходимо при раке молочной железы, ведь это позволяет выявить, насколько эффективным будет гормональное лечение в каждых конкретных случаях.

Некоторая сопротивляемость к гормональной терапии наблюдается даже у пациентов, имеющих результаты экспрессии ЭР+ и ПР+, ИГХ молочной железы все же необходимо проводить в обязательном порядке для определения точных параметров заболевания.

Игх исследование расшифровка молочной железы

Интерпретировать результаты иммуногистохимического исследования может только лечащий врач. Результаты игх молочной железы при этом не являются диагнозом для пациента.

Информацию из результатов исследования нельзя прямо использовать для назначения гормонального лечения, все данные носят лишь информационный характер и могут быть применимы только для назначения рекомендаций.

Постановку точного диагноза производит лечащий врач на основе результатов расшифровки иммуногистохимического исследования и анализа других источников, таких как анамнез, результаты других исследований и.т.д.

Расшифровка исследования

При расшифровке результатов ИГХ пользуются процентными единицами измерения.
Описание: производится процентная интерпретация соотношения количества клеток с экспрессией к экстрогенам и прогестерону к общему количеству клеток опухоли.

Приводится индивидуальный диапазон цифровых и процентных значений, которые могут находится в зависимости от многих факторов.

Выдача результата: результат выводят путем морфологической оценки состояния эндометрия или опухоли.

Результат выводят путем расчета соотношения количества ядер клеток с окраской к неокрашенным в совокупности на 100 клеток при увеличении в 40 раз в 10 репрезентативных полях.

(проало:4, оценка: 4,75 из 5)

Источник: http://moloczheleza.ru/issledovaniya/igh-molochnoj-zhelezy.html

Игх исследование — помощник в расшифровке биологии рака молочной железы

Несмотря на то, что всё больше в клиниках начинают использоваться методы генетического фенотипирования опухолей, ИГХ исследование остается на сегодня основным помощником в расшифровки биологии рака молочной железы, в прогнозировании его дальнейшего развития, “предсказателем” ответа опухоли на запланированное лечение.

В этой статье вы узнаете: что такое иммуногистохимическое (ИГХ) исследование, какое значение ИГХ имеет при раке молочной железы.

Гистохимия (окрашивание срезов в гистологии)

Перед тем, как патологоанатом (морфолог) начнёт рассматривать под микроскопом участок ткани молочной железы, полученный в результате биопсии, ему необходимо его окрасить специальными красителями.

Гистохимические красители наносят на тонкий срез участка ткани, чтобы рассмотреть под микроскопом, какие клетки там присутствуют, их расположение по отношению друг к другу (структуру ткани). Световая микроскопия является рутинным методом изучения окрашенных срезов ткани, широко используется в диагностике рака молочной железы. Наиболее часто для окрашивания срезов ткани используют:

• Гематоксилин — окрашивает клеточное ядро в темно-синий цвет;
• Эозином — делает цитоплазму клеток розовой. Совместное их использование называется гематоксилин-эозиновое окрашивание.

Что такое иммуногистохимия (ИГХ)

Патологоанатом — это врач, который долго учился в медицинском университете, чтобы знать, как с помощью микроскопа отличить в окрашенном срезе ткани раковые клетки от нормальных.

Обычно для постановки диагноза (доброкачественная это патология или злокачественная) ему достаточно рассмотреть под микроскопом срез ткани, окрашенный гематоксилином и эозином. Но иногда этого бывает недостаточно.

В такой ситуации на помощь приходит иммуногистохимия, которая к морфологической идентификации клеток и тканей добавляет иммунологический компонент.

Методика иммуногистохимии (ИГХ) дополняет морфологическое распознавание клеток и тканей, используя антитела к известным антигенам, которые являются специфическими для определенных типов клеток или клеточных компонентов. Расположение этих антител можно увидеть, используя световую микроскопию, так как антитела содержат зрительно-распознающиеся метки.

Первые методики иммуногистохимического анализа рака молочной железы использовали антитела с прикрепленными к ним флуоресцирующими метками, что требовало применения специального флуоресцентного микроскопа, позволяющего увидеть локализацию этих антител в срезе ткани молочной железы.

За последние 30 лет удалось существенно упростить методику, которая применяется при ИГХ исследовании молочной железы, за счет использования более специфичных антител (моноклональных антител) с ферментативными метками.

Однако радиоактивные элементы (пероксидаза, щелочная фосфатаза и флуоресцеин), без которых иногда не обойтись, требуют специальных методик и до сих пор широко используются.

Возникшая ситуация у каждой конкретной женщины с раком молочной железы требует применения тех или иных наборов антигенов (панелей антигенов), что в свою очередь требует от специалиста, выполняющего ИГХ, исследование срезов ткани молочной железы, знаний и громадного опыта.

Необходимость использования иммуногистохимии при раке молочной железы, контроль её качества и интерпретация полученных результатов должны контролироваться патоморфологическим отделением.

Важно, чтобы расшифровка полученных данных при ИГХ исследовании использовалась только в сочетании с морфологическим анализом тканей молочной железы, полученным в результате покраски их гематоксилином и эозином.

Сегодня иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы является рутинным методом в большинстве морфологических (патогистологических) лабораториях и используется для уточнения диагноза, а также с прогностической целью, в качестве предикативного (предсказывающего) указателя, как поведет себя рак молочной железы в дальнейшем.

Диагностика рака груди и ИГХ

Когда патологоанатом рассматривает под микроскопом биопсийный материал, перед ним стоит две основные диагностические задачи: определить происхождение опухолевых клеток, где они появились (в протоках, в дольках или в других участках молочной железы) и подтвердить или исключить их вторжение в близлежащие ткани.

Диагностические ИГХ маркеры, применяемые при раке груди

С первых дней использования ИГХ в онкологии велся поиск новых и совершенствовались уже существующие технологии применения антител, которые могли бы идентифицировать антигены клеток с высокой степенью специфичности и чувствительности. Перечисленные ниже ИГХ маркеры в настоящее время широко используются для уточнения гистопатологического диагноза рака молочной железы:

Цитокератины

• CK5, CK10, CK14 и CK17 являются цитокератинами базального слоя эпителия, экспрессируются миоэпителиальными клетками.
• CK5/6 или “базальные цитокератины» помогают распознать нормальные клетки молочной железы как миоэпителиальные, так и ламинарные (секретирующие).
• 34β12: это антитело помогает распознать цитокератины 1, 5, 10 и 14.

Маркеры гладких мышц

• Н-caldesmon. Его можно найти только в миоэпителиальных клетках молочных протоков, поэтому он обладает высокой специфичностью.
• Гладкомышечный актин (SMA). Это антитело помогает обнаружить актин в микрофиламентах; низкая специфичность, так как SMA обнаруживается в фибробластах (в тканях, которые регенерируют).
• Миозин тяжелых цепей гладких мышц (SMMHC) — структурный компонент миозина гладких мышц в SM2 изоформе. Экспрессируется миоэпителиальными клетками молочной железы, обладает высокой чувствительностью и специфичностью, так как SMMHC присутствует только в миоэпителиальных клетках, расположенных в протоках и дольках молочной железы, но отсутствует в фибробластах соединительной ткани железы.
• Calponin — полипептид, 34 кДа, модулирует активность актомиозина. Хорошая чувствительность, но присутствует в фибробластах соединительной ткани молочной железы.
• P63-p53 гомолог — ядерный маркер, весьма чувствительный к миоэпителиальным клеткам.
• CALLA: эндопептид, который экспрессируется в миоэпителиальных клетках.
• P-cadherin — молекула клеточной адгезии с высокой чувствительностью к миоэпителиальным клеткам нормальной ткани молочной железы. Не вступает в реакцию с фибробластами.

Другие маркеры

• Е-кадгерин — молекула клеточной адгезии. Используется, чтобы отличить протоковую карциному “in suti” (DCIS) от дольковой. Карциномы “in suti” (LCIS) — DCIS, как правило, выявляются по окрашиванию мембраны, в отличие от LCIS, при которой её нет.
• Маркеры меланомы: S100, Melan-A, HMB45.
• Маркеры лимфоцитов: CD20, LCA, CD15, CD30.
• Маркеры эндотелия сосудов: CD31, CD34, фактор VIII, d2-40 (podoplanin).
• Маркеры клеточной пролиферации: Ki67, MIB-1, PPh3.
• Маркеры апоптоза: Bcl-2 и Вах, Bcl-X.

Примеры использования ИГХ для разрешения проблем, возникших при определении патологии молочной железы

Существует много ситуаций, когда иммуногистохимия способствует постановке заключительного патогистологического диагноза при патологии молочных желез:

• Окрашивание e-кадгерином клеточной мембраны позволяет исключить дольковые неоплазии (ALH) и LCIS. Отсутствие окрашивания клеточной мембраны говорит в пользу дольковых опухолей.
• Обычная гиперплазия эпителия, или это эпителиальная атипия, или это DCIS. При доброкачественной гиперплазии можно обнаружить реактивность к CK5/6 и CK14, тогда как при атипической гиперплазии и DCIS её нет.

Это микро-инвазивная карцинома или что-то другое? Применение маркеров миоэпителиальных клеток имеет значение при оценке, присутствует или нет микро-инвазия карциномы (вторжение из ламинарного слоя в миоэпителиальный слой клеток).

Реактивность фибробластов, разрыв в окрашивании клеток, окрашивание миоэпителиальных клеток гладких мышц сосудов могут вызвать затруднения в интерпретации наблюдаемой картины под микроскопом.

В этой ситуации используются два маркера миоэпителиальных клеток, например, p63 и SMMHC, или ASMA, или calponin.

Какие ИГХ маркеры используются в диагностических панелях при патологии молочных желез

Набор маркеров (диагностическая панель), который используется в ИГХ исследованиях при раке молочной железы, во многом зависит от оснащенности лаборатории, в которой проводится иммуногистохимия, и опыта врача, проводящей ее. Ниже приведены рекомендации, какие ИГХ панели необходимо применять при патологии молочных желез, предоставленные одной из клиник:

• Миозин тяжелых цепей гладких мышц (SMMHC) или calponin — маркеры чувствительны и специфичны к цитоплазме миоэпителиальных клеток;
• Актин гладких мышц может быть использован, но все равно в интерпретации следует учитывать, что он присутствует в фибробластах (воспаление и рубец);
• P63 является чувствительным и специфичным маркером к ядрам миоэпителиальных клеток, но окрашивание может быть прерывистым. Применение маркера к цитоплазме миоэпителиальных клеток, таких как SMMHC или calponin, следует использовать, чтобы не возникли проблемы в интерпретации полученной картины.

При попытке определить наличие или отсутствие миоэпителиальных клеток следует использовать p63 и SMMHC, или calponin.

Роль иммуногистохимии в определении “прогностических” и “предиктивных” факторов при раке молочной железы

Прогностические факторы предоставляют информацию о возможном поведении рака молочной железы на момент его диагностики и не зависят от терапии. То есть с помощью них можно судить, как будет быстро прогрессировать рак и, соответственно, в зависимости от этого принять решение, какой объем и лечение предпочтительны в каждой конкретной ситуации.

В свою очередь, “предиктивные” (предсказывающие) факторы обеспечивают информацией, которая позволяет судить о вероятности ответа опухоли на конкретную терапию. Несмотря на то, что прогностические и предиктивные факторы возможно систематизировать по отдельности, в диагностике и классификации рака молочной железы чаще они являются как прогностическими, так и предиктивными.

Например, наличие высокой экспрессии HER2. Если рак молочной железы her2 положительный (большое количество в опухоли белка HER2), то он протекает агрессивно, с ранним метастазированием в отдаленные органы. А если опухоль содержит малое количество этого белка (рак молочной железы her2 негативный), она не будет реагировать на применение таргетного препарата герцептина.

Рекомендуем прочесть статью о том, что такое люминальный рак молочной железы. Из нее вы можете узнать, как современные методы исследования помогают определить подтипы рака, как выбирают оптимальный метод лечения рака молочной железы в зависимости от результатов исследования.

“Базальные” ИГХ маркеры

Существует подразделение рака молочной железы в зависимости то того, какие гены экспрессируют его клетки (профиль экспрессии генов).

Опухоли, профиль которых характерен для базальных или миоэпителиальных клеток нормальной молочной железы, будут показывать наличие «базальных» маркеров. Такие опухоли имеют неблагоприятный прогноз.

В большинстве из этих «базальных» опухолей полностью отсутствуют ER, PR (рецепторы к эстрогену и прогестерону) и белок HER2. Они часто метастазируют в головной мозг, в легкие.

К этим опухолям с плохим прогнозом относится и так называемый «трижды негативный рак молочной железы», в котором отсутствуют ER, PR и HER2, но экспрессируются базальные цитокератины 5/6 и 14, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) и C-KIT. Они могут также экспрессировать P-кадгерин и часто p63.

Есть сходство между «базальным» раком молочной железы и раками, которые выявляются у женщин с BRCA1 мутацией.

EGFR экспрессируется часто в «базальных» раках, поэтому пациентки с такими опухолями могут извлечь пользу при лечении ингибиторами EGFR.

ИГХ маркеры пролиферации (скорости роста опухоли)

Количество митозов или процент клеток, находящихся в митозе, давно считается морфологическим «биомаркером» прогноза рака. Существует ряд ИГХ маркеров, которые демонстрируют пролиферативную активность клеток (количество митозов):

• Ki67 — антиген, который экспрессируется в ядрах клеток на всех этапах клеточного цикла и является полезным маркером клеточной пролиферации;
• MIB1 — антитело, которое реагирует с Ki-67 в ткани, зафиксированной формалином или парафином;
• PPh3.

ИГХ маркеры апоптоза

Апоптоз или «запрограммированный суицид клетки» является биомаркером агрессивных опухолей. Белки апоптоза можно идентифицировать с помощью ИГХ:

Другие “прогностические” маркеры

• р53. Мутации в гене р53 супрессора опухолей (TP53) выявляются в 20-30% случаях рака молочной железы. Эти генные мутации наблюдаются чаще у женщин с наследственными синдромами рака молочной железы, чем у женщин с спорадическим раком. Для пациентки с генетической предрасположенностью к раку молочной железы может быть рекомендовано р53-тестирование. Обнаружение мутаций в р53 также рассматривается в качестве возможного предсказателя ответа рака молочной железы на химиотерапию, но обнаружение белка р53 иммуногистохимически в опухоли не отражает статус мутации р53.
• Топоизомераза II альфа. Это мишень, на которую направлено действие антрациклина — химиотерапевтического препарата, который часто используется в лечение рака молочной железы.

Источник: http://GrudInfo.ru/igh-molochnoi-zhelezy/

Игх исследование молочной железы: анализ на опухоль и расшифровка

calendar_today 31 декабря 2016

visibility 95 просмотров

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы (ИГХ) – лабораторный способ изучения тканей, полученных с помощью биопсии. Методика иммуногистохимии применяется чтобы:

• определить характер и тип патологии;
• выявить чувствительность, а также устойчивость клеток опухоли к тем или иным вариантам химиотерапии или радиотерапии;
• обнаружить источник рака, если имеются метастазы неясного генеза;
• установить степень распространения ракового процесса;
• узнать гистогенетическое происхождение заболевания;
• оценить успешность проведённого лечения;
• диагностировать пролиферацию новообразования;
• определить нозологический вариант раковой опухоли.

Противопоказаний процедура ИГХ практически не имеет. Проблемы с проведением анализа возникают лишь при невозможности забора образцов повреждённых клеток по причине труднодоступной локализации онкообразования.

Процедура выполнения ИГХ

Для проведения иммуногистохимического исследования нужна поражённая опухолью ткань. Обычно ее получают при выполнении биопсии или после проведения операции.

Взятый образец помещают в формалин и отправляют в лабораторию. Там его обезжиривают, заливают специальным парафином. Потом выполняют микротомирование – делают тонкие срезы до 1 мкм с парафиновых блоков.

Их раскладывают на специальных стёклах. Лишь потом начинают процедуру.

Выполняется окрашивание исследуемого материала определёнными реактивами в необходимой концентрации. Для анализа может применяться малая панель – с набором из 5 разновидностей антител или большая панель – насчитывающая от 6 типов маркеров.

От количества HER2 рецепторов зависит цветовая комбинация реактивов с опухолевыми клетками. Чем их больше имеется в исследуемом образце, тем интенсивнее окраска. Результаты анализа ИГХ обычно готовы в течение 1-2 недель. Точность иммуногистохимии зависит от субъективного восприятия результатов гистологом.

Расшифровка анализа

Иммуногистохимия отображает концентрацию HER2-белка (рецептора человеческого эпидермального фактора роста) в патологическом образце. Благодаря ему в здоровом организме контролируется нормальный процесс деления и самовосстановления клеток.

Почти у 25 % женщин с карциномой молочной железы рецептор человеческого эпидермального фактора роста производит чрезмерное количество HER2. Потом клетки начинают неконтролируемо расти и делиться. Итоги иммуногистохимического исследования HER2 статуса при карциноме грудной клетки интерпретируют в зависимости от интенсивности окраски по специальной шкале:

• 0-1+ обозначает, что HER2-белок обнаружен в нормальном количестве и раковая опухоль негативная (75% ситуаций). Необходимости на этом этапе заболевания в медикаментозных препаратах нет;
• 2+ подтверждает среднюю концентрацию HER2-белка в исследуемом материале и наличие отрицательной карциномы груди;
• 3+ сигнализирует, что фиксируется превышение выработки HER2-белка, а онкологическое образование положительное (25%).

HER2 позитивный рак груди характеризуется агрессивным вариантом течения. Опухоль увеличивается намного быстрее, чем при HER2 негативной карциноме. В 30% случаев HER2-положительный вариант с течением времени преобразовывается в HER2 — отрицательный.

Если после исследования подтверждается положительный HER2, то доктор может назначить лечение препаратами Лапатаниб и Герцептин. Эти медикаменты используются лишь при позитивной форме HER2. Они прикрепляются к белку HER2, не позволяют ему достичь злокачественных клеток и стимулировать их рост. Не рекомендуется применение Лапатаниба и Герцептина для лечения негативной карциномы груди.

Если опухоль оценена на 2+, то желательно провести ещё один анализ. Полученный результат не всегда правдиво обозначает превышение показателей HER2-белка.

Для уточнения информации дополнительно выполняют тест FISH. Он показывает уровень HER2-белка в каждой клетке и отвечает за его перепроизводство.

FISH-тест бывает либо положительный (нормальное количество HER2) либо отрицательный (амплификация генов).

При выполнении ИГХ учитывается также процентное соотношение Ki-67, характеризующее злокачественность ракового процесса. Если при диагностированной карциноме груди Ki-67 – 15%, то прогноз, скорее всего, будет благоприятным. Если Ki-67 достигает 30% и более, то опухоль считается высокоагрессивной.

Только специалист должен ставить точный диагноз на основании результатов расшифровки иммуногистохимии и при необходимости, итогов других анализов.

Источник: https://RusMeds.com/igh-issledovanie-molochnoj-zhelezy